Ksyloosin käyttö muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla: Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu

Heidi Siekkinen

Research output: ThesisMaster's thesisTheses

Abstract

Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.
Original languageFinnish
QualificationMaster Degree
Awarding Institution
  • University of Oulu
Place of PublicationOulu
Publisher
Publication statusPublished - 2004
MoE publication typeG2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis

Cite this

@phdthesis{1d7b4ad29ef447fd94f3f43549af6274,
title = "Ksyloosin k{\"a}ytt{\"o} muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla: Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu",
abstract = "T{\"a}ss{\"a} ty{\"o}ss{\"a} m{\"a}{\"a}ritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymist{\"a} sek{\"a} kahden eri promoottorin avulla ett{\"a} kanden erilaisen geenin yl{\"a}juoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sek{\"a} hapettomissa ett{\"a} hapellisissa olosuhteissa tehdyiss{\"a} pullokasvatuksissa, sill{\"a} integranttikannoista se k{\"a}ytti parhaiten ksyloosia, tuotti v{\"a}hiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sill{\"a} mit{\"a} pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sit{\"a} paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla s{\"a}{\"a}dellyn XKS1-geenin yl{\"a}juoksulla olevan ylim{\"a}{\"a}r{\"a}isen ATG:n l{\"a}sn{\"a}olo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yl{\"a}juoksun ylim{\"a}{\"a}r{\"a}inen ATG oli poistettu. Ty{\"o}n toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon my{\"o}nteisesti vaikuttavia geenej{\"a} erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelm{\"a} suunniteltiin onnistuneesti, mutta sit{\"a} ei saatu toimimaan t{\"a}m{\"a}n ty{\"o}n aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.",
author = "Heidi Siekkinen",
note = "CA: BEL pro gradu Oulun yliopisto, Biokemian laitos",
year = "2004",
language = "Finnish",
publisher = "University of Oulu",
address = "Finland",
school = "University of Oulu",

}

TY - THES

T1 - Ksyloosin käyttö muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla

T2 - Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu

AU - Siekkinen, Heidi

N1 - CA: BEL pro gradu Oulun yliopisto, Biokemian laitos

PY - 2004

Y1 - 2004

N2 - Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.

AB - Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.

M3 - Master's thesis

PB - University of Oulu

CY - Oulu

ER -