Ksyloosin käyttö muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla: Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu

Heidi Siekkinen

Ksyloosin käyttö muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla: Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu

Heidi Siekkinen

VTT Technical Research Centre of Finland

Research output: Thesis › Master's thesis

Abstract

Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.

Original language	Finnish
Qualification	Master Degree
Awarding Institution	University of Oulu
Place of Publication	Oulu
Publisher	University of Oulu
Publication status	Published - 2004
MoE publication type	G2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis

Cite this

@mastersthesis{1d7b4ad29ef447fd94f3f43549af6274,

title = "Ksyloosin k{\"a}ytt{\"o} muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla: Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu",

abstract = "T{\"a}ss{\"a} ty{\"o}ss{\"a} m{\"a}{\"a}ritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymist{\"a} sek{\"a} kahden eri promoottorin avulla ett{\"a} kanden erilaisen geenin yl{\"a}juoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sek{\"a} hapettomissa ett{\"a} hapellisissa olosuhteissa tehdyiss{\"a} pullokasvatuksissa, sill{\"a} integranttikannoista se k{\"a}ytti parhaiten ksyloosia, tuotti v{\"a}hiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sill{\"a} mit{\"a} pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sit{\"a} paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla s{\"a}{\"a}dellyn XKS1-geenin yl{\"a}juoksulla olevan ylim{\"a}{\"a}r{\"a}isen ATG:n l{\"a}sn{\"a}olo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yl{\"a}juoksun ylim{\"a}{\"a}r{\"a}inen ATG oli poistettu. Ty{\"o}n toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon my{\"o}nteisesti vaikuttavia geenej{\"a} erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelm{\"a} suunniteltiin onnistuneesti, mutta sit{\"a} ei saatu toimimaan t{\"a}m{\"a}n ty{\"o}n aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.",

author = "Heidi Siekkinen",

note = "CA: BEL pro gradu Oulun yliopisto, Biokemian laitos",

year = "2004",

language = "Finnish",

publisher = "University of Oulu",

address = "Finland",

school = "University of Oulu",

}

TY - THES

T1 - Ksyloosin käyttö muunnellulla Saccharomyces cerevisiae -hiivalla

T2 - Tutkimuksia ksylulokinaasi-entsyymin ilmentymistasoista ja hapetus-pelkistys-tasapainosta: Pro gradu

AU - Siekkinen, Heidi

N1 - CA: BEL pro gradu Oulun yliopisto, Biokemian laitos

PY - 2004

Y1 - 2004

N2 - Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.

AB - Tässä työssä määritettiin CEN.PK2-pohjaiselle XYL1-ja XYL2-geenit omaavalle leivinhiiva-kannalle ksylulokinaasia tuottavan XKS1-geenin sopiva ilmentymistaso vertailemalla ilmentymistä sekä kahden eri promoottorin avulla että kanden erilaisen geenin yläjuoksun sekvenssin avulla, geenin sijaitessa joko genomissa tai plasmidissa. H3025-kanta 4,3 nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuudellaan oli optimaalisin integranttikanta sekä hapettomissa että hapellisissa olosuhteissa tehdyissä pullokasvatuksissa, sillä integranttikannoista se käytti parhaiten ksyloosia, tuotti vähiten ksylitolia ja eniten etanolia. Ksyloosimaljoilla 4,3:n nkat/mg proteiinia XK-aktiivisuus ei kuitenkaan johtanut parhaaseen kasvuun, sillä mitä pienempi XK-aktiivisuus kannalla oli, sitä paremmin se kasvoi. mADH1-promoottorilla säädellyn XKS1-geenin yläjuoksulla olevan ylimääräisen ATG:n läsnäolo H2217-kannalla alensi XK-aktiivisuutta kymmenkertaisesti verrattuna H3025-kantaan, jolta yläjuoksun ylimääräinen ATG oli poistettu. Työn toisena tarkoituksena oli rakentaa leivinhiiva-hiivakanta, jonka avulla voitaisiin seuloa hapetus-pelkistys-tasapainoon myönteisesti vaikuttavia geenejä erilaisista geenikirjastoista. Seulontamenetelmä suunniteltiin onnistuneesti, mutta sitä ei saatu toimimaan tämän työn aikana kasvatusten toistuvien kontaminaatioiden vuoksi.

M3 - Master's thesis

PB - University of Oulu

CY - Oulu

ER -