Abstract
Tutkimuksen tavoitteena oli kehittää menetelmä lipoksygenaasia
tuottavien mikrobien seulontaan elatusmaljalla. Tavoitteena oli myös
mikrotiitterilevylle soveltuvan lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmän
kehittäminen sekä lipoksygenaasin tuottaminen ravistelukasvatuksissa.
Työn kirjallisuusosassa on käsitelty lipoksygenaasin katalysoimia reaktioita,
esiintymistä kasvikunnassa ja mikrobeissa sekä lipoksygenaasin ominaisuuksia.
Lisäksi on käsitelty lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmiä ja
bioteknisiä sovelluksia.
Tutkimusosassa tarkasteltiin aluksi lipoksygenaasin
aktiivisuusmääritysmenetelmiä. Kirjallisuudesta valittujen menetelmien
lineaarisuutta ja lipoksygenaasin detektiorajaa eri menetelmissä tutkittiin
soijan lipoksygenaasilla. Tulosten perusteella valittiin
3-(dimetyyliamino)bentsoehapon ja 3-metyyli-2-bentsotiatsolinonihydratsonin
väliseen reaktioon perustuva menetelmä jatkotutkimuksiin. Menetelmän
lineaarisuutta tutkittiin mikrotiitterilevyllä ja sen havaittiin soveltuvan
lipoksygenaasin aktiivisuusmääritykseen. Menetelmän soveltuvuutta
lipoksygenaasi-indikaattoriksi elatusmaljalla tutkittiin soijan
lipoksygenaasilla ja lipoksygenaasia tuottavalla Thermoactinomyces vulgaris
-bakteerilla. Menetelmä toimi soijan lipoksygenaasilla, mutta ei T. vulgaris
-bakteerilla. Lipoksygenaasin substraatin, linolihapon, havaittiin inhiboivan
T. vulgaris -bakteerin kasvua.
T. vulgaris -bakteeria ja useita homeita, joista on kirjallisuuden mukaan
eristetty lipoksygenaasia, kasvatettiin ravistelupulloissa. T. vulgaris
–bakteeri tuotti lipoksygenaasia, mutta useimpien homeiden kohdalla
lipoksygenaasin tuotto jäi hyvin vähäiseksi. Kasvatusalustan vaikutusta
useimpien lipoksygenaasin tuottoon tutkittiin kasvattamalla T. vulgaris
–bakteeria kasvatusalustoilla. Soijaöljyn ja soijajauhon komponenttien
läsnäolon kasvatusalustassa havaittiin parantavan lipoksygenaasiaktiivisuuden
saantoa.
| Translated title of the contribution | Lipoxygenase activity assays and screening methods: Master's thesis |
|---|---|
| Original language | Finnish |
| Qualification | Master Degree |
| Awarding Institution |
|
| Place of Publication | Espoo |
| Publisher | |
| Publication status | Published - 2003 |
| MoE publication type | G2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis |