Lipoksygenaasin aktiivisuusmääritys- ja seulontamenetelmät: Diplomityö

Translated title of the contribution: Lipoxygenase activity assays and screening methods: Master's thesis

Anna-Katri Valtonen

Research output: ThesisMaster's thesisTheses

Abstract

Tutkimuksen tavoitteena oli kehittää menetelmä lipoksygenaasia tuottavien mikrobien seulontaan elatusmaljalla. Tavoitteena oli myös mikrotiitterilevylle soveltuvan lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmän kehittäminen sekä lipoksygenaasin tuottaminen ravistelukasvatuksissa. Työn kirjallisuusosassa on käsitelty lipoksygenaasin katalysoimia reaktioita, esiintymistä kasvikunnassa ja mikrobeissa sekä lipoksygenaasin ominaisuuksia. Lisäksi on käsitelty lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmiä ja bioteknisiä sovelluksia. Tutkimusosassa tarkasteltiin aluksi lipoksygenaasin aktiivisuusmääritysmenetelmiä. Kirjallisuudesta valittujen menetelmien lineaarisuutta ja lipoksygenaasin detektiorajaa eri menetelmissä tutkittiin soijan lipoksygenaasilla. Tulosten perusteella valittiin 3-(dimetyyliamino)bentsoehapon ja 3-metyyli-2-bentsotiatsolinonihydratsonin väliseen reaktioon perustuva menetelmä jatkotutkimuksiin. Menetelmän lineaarisuutta tutkittiin mikrotiitterilevyllä ja sen havaittiin soveltuvan lipoksygenaasin aktiivisuusmääritykseen. Menetelmän soveltuvuutta lipoksygenaasi-indikaattoriksi elatusmaljalla tutkittiin soijan lipoksygenaasilla ja lipoksygenaasia tuottavalla Thermoactinomyces vulgaris -bakteerilla. Menetelmä toimi soijan lipoksygenaasilla, mutta ei T. vulgaris -bakteerilla. Lipoksygenaasin substraatin, linolihapon, havaittiin inhiboivan T. vulgaris -bakteerin kasvua. T. vulgaris -bakteeria ja useita homeita, joista on kirjallisuuden mukaan eristetty lipoksygenaasia, kasvatettiin ravistelupulloissa. T. vulgaris –bakteeri tuotti lipoksygenaasia, mutta useimpien homeiden kohdalla lipoksygenaasin tuotto jäi hyvin vähäiseksi. Kasvatusalustan vaikutusta useimpien lipoksygenaasin tuottoon tutkittiin kasvattamalla T. vulgaris –bakteeria kasvatusalustoilla. Soijaöljyn ja soijajauhon komponenttien läsnäolon kasvatusalustassa havaittiin parantavan lipoksygenaasiaktiivisuuden saantoa.
Original languageFinnish
QualificationMaster Degree
Awarding Institution
  • Helsinki University of Technology
Place of PublicationEspoo
Publisher
Publication statusPublished - 2003
MoE publication typeG2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis

    Fingerprint

Cite this

Valtonen, A-K. (2003). Lipoksygenaasin aktiivisuusmääritys- ja seulontamenetelmät: Diplomityö. Helsinki University of Technology.