Abstract
Tutkielman kirjallisuusosassa tarkasteltiin transglutaminaasin
esiintymistä, rakenteita, sen katalysoimia reaktioita, aktiivisuuteen
vaikuttavia tekijöitä, biologista merkitystä ja käyttö-sovelluksia.
Kokeellisen osan tavoitteena oli selvittää lakkaasin ja tyrosinaasin kykyä
ristisi-toa valittuja malliproteiineja sekä selvittää transglutaminaasin kykyä
ristisitoa vehnän glu-teenin gluteniineja ja gliadiineja.
Malliproteiineja käsiteltiin Trametes hirsuta- ja Melanocarpus albomyces
-homeiden lak-kaaseilla ja Agaricus bisporus -sienen tyrosinaasilla fenolisten
happojen läsnä ollessa ja il-man niitä. Streptoverticillium mobaraense
-bakteerin transglutaminaasilla käsiteltiin gliadii-nia ja gluteniinia, jotka
eristettiin gluteenista uuttamalla. Reaktiotuotteita analysoitiin
nat-riumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla (SDS-PAGE)
ja geelisuoda-tuskromatografialla (GPC). Fenolisten happojen toimimisesta
lakkaasin ja tyrosinaasin substraatteina varmistuttiin hapenkulutuskokein. T.
hirsuta -lakkaasin kykyä hapettaa kys-teiiniä kystiiniksi analysoitiin
nestekromatografia-massaspektrometrialla (LC-MS).
Lakkaasit ja tyrosinaasi eivät saaneet aikaan kauraproteiinien eivätkä
kaseiinin ristisitoutu-misesta kertovaa molekyylimassan suurenemista
SDS-PAGE:lla tutkittuna. LC-MS -ana-lyysin perusteella T. hirsuta -lakkaasi
kuitenkin muodosti disulfidisidoksen kahden vapaan kysteiinimolekyylin
välille. Ferula-, kahvi-, vanilliini- tai p-kumariinihapon läsnä ollessa T.
hirsuta -lakkaasi aiheutti kauraproteiinien ristisitoutumista. Ferulahapon
kanssa sama todet-tiin kaseiinilla ja naudan seerumin albumiinilla (BSA).
Ferulahapon kanssa myös tyrosinaa-si aikaansai BSA:n ristisitoutumista, mutta
tehottomammin kuin lakkaasi. Transglutaminaa-sin vaikutuksesta gluteniinin
sekä pienen että suuren molekyylimassan alayksiköt ristisitou-tuivat mutta
gliadiinit eivät juuri ollenkaan. Proteiinien niukkaliukoisuus haittasi
entsyymi-reaktioseosten analysointia GPC:llä.
Lakkaasit ja tyrosinaasi eivät ristisitoneet tutkittuja malliproteiineja ilman
fenolisen hapon läsnäoloa reaktioseoksessa. Sen sijaan fenolisen hapon kanssa
malliproteiinien ristisitoutu-mista tapahtui kaikissa tutkituissa
tapauksissa. Muodostuneet ristisidokset eivät ole disulfi-disidoksia, mutta
niiden tarkkaa rakennetta ei voitu päätellä. Transglutaminaasi ristisitoi
gluteniinia tehokkaammin kuin gliadiinia.
| Translated title of the contribution | Cross-linking of the model proteins by laccase, tyrosinase, and transglutaminase: Master's thesis |
|---|---|
| Original language | Finnish |
| Qualification | Master Degree |
| Awarding Institution |
|
| Place of Publication | Helsinki |
| Publisher | |
| Publication status | Published - 2003 |
| MoE publication type | G2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis |
Keywords
- proteins
- enzymes
- cross-linking
- laccase
- tyrosinase
- transglutaminase