Säätely- ja permeaasimutaatioiden vaikutukset ksyloosin sisäänottoon ja metaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa: Pro gradu

Titta Manninen

Research output: ThesisMaster's thesisTheses

Abstract

Työssä tutkittiin RGT2-geenin dominantin mutaation sekä RGT1-geenin deleetion erillisiä vaikutuksia ksyloosimetaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa. Mutaatioilla pyrittiin saamaan aikaan heksoositransportterigeenien konstitutiivinen ekspressio, jotta ksyloosia kuljettavia heksoositransporttereita olisi plasmamembraanilla enemmän ja ksyloosin sisäänotto paranisi. Työssä tutkittiin myös RGT1-deleetion vaikutusta H2220-nollamutanttikannassa (hxt1-7, gal2), jossa ekspressoitiin HXT1- tai HXT7-geenejä. Lisäksi HXT1-geenin mutageneesillä pyrittiin parantamaan kyseisen heksoositransportterin affiniteettia ksyloosille. Työn tarkoituksena oli selvittää pystytäänkö muutoksilla parantamaan ksyloosin sisäänottoa ja ksyloosimetaboliaa. Ksyloosimetabolian tutkimiseksi RGT2-1- ja rgtl-mutaatiokantoja kasvatettiin ksyloosilla aerobisesti ja anaerobisesti. Näistä pullokasvatuksista otettiin näytteitä, joista tutkittiin heksoositransportterigeenien 1,2,3 ja 4 ekspressiotasoja. Lisäksi työssä tutkittiin molempien mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottoa in vitro. RGT2-1- ja rgt1-mutaatiot lisäsivät HXT-geenien ekspressiota kasvatettaessa kantoja ksyloosilla. rgtl-kannassa HXT3-geenin ekspressio kohosi 15-30-kertaisesti ja HXT4-geenin ekspressio 4-11-kertaisesti aerobisissa ja anaerobisissa olosuhteissa. HXT1-geenin ekspressio lisääntyi rgtl-kannassa 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-kannassa HXT3-geenin ekspressio lisääntyi 7-15-kertaisesti ja HXT1-geenin ekspressio 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-ja rgtl-mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottonopeudet (Vmax) olivat noin 400-500 nmol/min/mg proteiinia ja Km arvot ksyloosille noin 150-180 mM. RGT1-geenin deleetion sekä HXT7-ekspressioplasmidin sisältämä nollamutanttikanta kasvoi tutkituissa ksyloosipitoisuuksissa maljalla paremmin kuin sen verrokki. Parantuneesta ksyloosin sisäänotosta ja heksoositransportterigeenien ekspressiosta huolimatta rgt1- ja RGT2-1-mutaatioiden vaikutukset solunsisäiseen ksyloosimetaboliaan jäivät vähäisiksi.
Original languageFinnish
QualificationMaster Degree
Awarding Institution
  • University of Helsinki
Place of PublicationHelsinki
Publisher
Publication statusPublished - 2004
MoE publication typeG2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis

Keywords

  • ksyloosi
  • Rgt1p
  • Rgt2p
  • HXT-geenit

Cite this

@phdthesis{52acdba0f5b94c278246aabf5ae17263,
title = "S{\"a}{\"a}tely- ja permeaasimutaatioiden vaikutukset ksyloosin sis{\"a}{\"a}nottoon ja metaboliaan ksyloosia k{\"a}ytt{\"a}v{\"a}ss{\"a} Saccharomyces cerevisiae -hiivassa: Pro gradu",
abstract = "Ty{\"o}ss{\"a} tutkittiin RGT2-geenin dominantin mutaation sek{\"a} RGT1-geenin deleetion erillisi{\"a} vaikutuksia ksyloosimetaboliaan ksyloosia k{\"a}ytt{\"a}v{\"a}ss{\"a} Saccharomyces cerevisiae -hiivassa. Mutaatioilla pyrittiin saamaan aikaan heksoositransportterigeenien konstitutiivinen ekspressio, jotta ksyloosia kuljettavia heksoositransporttereita olisi plasmamembraanilla enemm{\"a}n ja ksyloosin sis{\"a}{\"a}notto paranisi. Ty{\"o}ss{\"a} tutkittiin my{\"o}s RGT1-deleetion vaikutusta H2220-nollamutanttikannassa (hxt1-7, gal2), jossa ekspressoitiin HXT1- tai HXT7-geenej{\"a}. Lis{\"a}ksi HXT1-geenin mutageneesill{\"a} pyrittiin parantamaan kyseisen heksoositransportterin affiniteettia ksyloosille. Ty{\"o}n tarkoituksena oli selvitt{\"a}{\"a} pystyt{\"a}{\"a}nk{\"o} muutoksilla parantamaan ksyloosin sis{\"a}{\"a}nottoa ja ksyloosimetaboliaa. Ksyloosimetabolian tutkimiseksi RGT2-1- ja rgtl-mutaatiokantoja kasvatettiin ksyloosilla aerobisesti ja anaerobisesti. N{\"a}ist{\"a} pullokasvatuksista otettiin n{\"a}ytteit{\"a}, joista tutkittiin heksoositransportterigeenien 1,2,3 ja 4 ekspressiotasoja. Lis{\"a}ksi ty{\"o}ss{\"a} tutkittiin molempien mutaatiokantojen ksyloosin sis{\"a}{\"a}nottoa in vitro. RGT2-1- ja rgt1-mutaatiot lis{\"a}siv{\"a}t HXT-geenien ekspressiota kasvatettaessa kantoja ksyloosilla. rgtl-kannassa HXT3-geenin ekspressio kohosi 15-30-kertaisesti ja HXT4-geenin ekspressio 4-11-kertaisesti aerobisissa ja anaerobisissa olosuhteissa. HXT1-geenin ekspressio lis{\"a}{\"a}ntyi rgtl-kannassa 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-kannassa HXT3-geenin ekspressio lis{\"a}{\"a}ntyi 7-15-kertaisesti ja HXT1-geenin ekspressio 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-ja rgtl-mutaatiokantojen ksyloosin sis{\"a}{\"a}nottonopeudet (Vmax) olivat noin 400-500 nmol/min/mg proteiinia ja Km arvot ksyloosille noin 150-180 mM. RGT1-geenin deleetion sek{\"a} HXT7-ekspressioplasmidin sis{\"a}lt{\"a}m{\"a} nollamutanttikanta kasvoi tutkituissa ksyloosipitoisuuksissa maljalla paremmin kuin sen verrokki. Parantuneesta ksyloosin sis{\"a}{\"a}notosta ja heksoositransportterigeenien ekspressiosta huolimatta rgt1- ja RGT2-1-mutaatioiden vaikutukset solunsis{\"a}iseen ksyloosimetaboliaan j{\"a}iv{\"a}t v{\"a}h{\"a}isiksi.",
keywords = "ksyloosi, Rgt1p, Rgt2p, HXT-geenit",
author = "Titta Manninen",
note = "CA: BEL OH: pro gradu Helsingin yliopisto, Soveltavan kemian ja mikrobiologian laitos 91 s. + liitt.",
year = "2004",
language = "Finnish",
publisher = "University of Helsinki",
address = "Finland",
school = "University of Helsinki",

}

Säätely- ja permeaasimutaatioiden vaikutukset ksyloosin sisäänottoon ja metaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa : Pro gradu. / Manninen, Titta.

Helsinki : University of Helsinki, 2004. 91 p.

Research output: ThesisMaster's thesisTheses

TY - THES

T1 - Säätely- ja permeaasimutaatioiden vaikutukset ksyloosin sisäänottoon ja metaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa

T2 - Pro gradu

AU - Manninen, Titta

N1 - CA: BEL OH: pro gradu Helsingin yliopisto, Soveltavan kemian ja mikrobiologian laitos 91 s. + liitt.

PY - 2004

Y1 - 2004

N2 - Työssä tutkittiin RGT2-geenin dominantin mutaation sekä RGT1-geenin deleetion erillisiä vaikutuksia ksyloosimetaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa. Mutaatioilla pyrittiin saamaan aikaan heksoositransportterigeenien konstitutiivinen ekspressio, jotta ksyloosia kuljettavia heksoositransporttereita olisi plasmamembraanilla enemmän ja ksyloosin sisäänotto paranisi. Työssä tutkittiin myös RGT1-deleetion vaikutusta H2220-nollamutanttikannassa (hxt1-7, gal2), jossa ekspressoitiin HXT1- tai HXT7-geenejä. Lisäksi HXT1-geenin mutageneesillä pyrittiin parantamaan kyseisen heksoositransportterin affiniteettia ksyloosille. Työn tarkoituksena oli selvittää pystytäänkö muutoksilla parantamaan ksyloosin sisäänottoa ja ksyloosimetaboliaa. Ksyloosimetabolian tutkimiseksi RGT2-1- ja rgtl-mutaatiokantoja kasvatettiin ksyloosilla aerobisesti ja anaerobisesti. Näistä pullokasvatuksista otettiin näytteitä, joista tutkittiin heksoositransportterigeenien 1,2,3 ja 4 ekspressiotasoja. Lisäksi työssä tutkittiin molempien mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottoa in vitro. RGT2-1- ja rgt1-mutaatiot lisäsivät HXT-geenien ekspressiota kasvatettaessa kantoja ksyloosilla. rgtl-kannassa HXT3-geenin ekspressio kohosi 15-30-kertaisesti ja HXT4-geenin ekspressio 4-11-kertaisesti aerobisissa ja anaerobisissa olosuhteissa. HXT1-geenin ekspressio lisääntyi rgtl-kannassa 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-kannassa HXT3-geenin ekspressio lisääntyi 7-15-kertaisesti ja HXT1-geenin ekspressio 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-ja rgtl-mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottonopeudet (Vmax) olivat noin 400-500 nmol/min/mg proteiinia ja Km arvot ksyloosille noin 150-180 mM. RGT1-geenin deleetion sekä HXT7-ekspressioplasmidin sisältämä nollamutanttikanta kasvoi tutkituissa ksyloosipitoisuuksissa maljalla paremmin kuin sen verrokki. Parantuneesta ksyloosin sisäänotosta ja heksoositransportterigeenien ekspressiosta huolimatta rgt1- ja RGT2-1-mutaatioiden vaikutukset solunsisäiseen ksyloosimetaboliaan jäivät vähäisiksi.

AB - Työssä tutkittiin RGT2-geenin dominantin mutaation sekä RGT1-geenin deleetion erillisiä vaikutuksia ksyloosimetaboliaan ksyloosia käyttävässä Saccharomyces cerevisiae -hiivassa. Mutaatioilla pyrittiin saamaan aikaan heksoositransportterigeenien konstitutiivinen ekspressio, jotta ksyloosia kuljettavia heksoositransporttereita olisi plasmamembraanilla enemmän ja ksyloosin sisäänotto paranisi. Työssä tutkittiin myös RGT1-deleetion vaikutusta H2220-nollamutanttikannassa (hxt1-7, gal2), jossa ekspressoitiin HXT1- tai HXT7-geenejä. Lisäksi HXT1-geenin mutageneesillä pyrittiin parantamaan kyseisen heksoositransportterin affiniteettia ksyloosille. Työn tarkoituksena oli selvittää pystytäänkö muutoksilla parantamaan ksyloosin sisäänottoa ja ksyloosimetaboliaa. Ksyloosimetabolian tutkimiseksi RGT2-1- ja rgtl-mutaatiokantoja kasvatettiin ksyloosilla aerobisesti ja anaerobisesti. Näistä pullokasvatuksista otettiin näytteitä, joista tutkittiin heksoositransportterigeenien 1,2,3 ja 4 ekspressiotasoja. Lisäksi työssä tutkittiin molempien mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottoa in vitro. RGT2-1- ja rgt1-mutaatiot lisäsivät HXT-geenien ekspressiota kasvatettaessa kantoja ksyloosilla. rgtl-kannassa HXT3-geenin ekspressio kohosi 15-30-kertaisesti ja HXT4-geenin ekspressio 4-11-kertaisesti aerobisissa ja anaerobisissa olosuhteissa. HXT1-geenin ekspressio lisääntyi rgtl-kannassa 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-kannassa HXT3-geenin ekspressio lisääntyi 7-15-kertaisesti ja HXT1-geenin ekspressio 5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-ja rgtl-mutaatiokantojen ksyloosin sisäänottonopeudet (Vmax) olivat noin 400-500 nmol/min/mg proteiinia ja Km arvot ksyloosille noin 150-180 mM. RGT1-geenin deleetion sekä HXT7-ekspressioplasmidin sisältämä nollamutanttikanta kasvoi tutkituissa ksyloosipitoisuuksissa maljalla paremmin kuin sen verrokki. Parantuneesta ksyloosin sisäänotosta ja heksoositransportterigeenien ekspressiosta huolimatta rgt1- ja RGT2-1-mutaatioiden vaikutukset solunsisäiseen ksyloosimetaboliaan jäivät vähäisiksi.

KW - ksyloosi

KW - Rgt1p

KW - Rgt2p

KW - HXT-geenit

M3 - Master's thesis

PB - University of Helsinki

CY - Helsinki

ER -