Abstract
Työssä tutkittiin RGT2-geenin dominantin mutaation sekä RGT1-geenin
deleetion erillisiä vaikutuksia ksyloosimetaboliaan ksyloosia käyttävässä
Saccharomyces cerevisiae -hiivassa. Mutaatioilla pyrittiin saamaan aikaan
heksoositransportterigeenien konstitutiivinen ekspressio, jotta ksyloosia
kuljettavia heksoositransporttereita olisi plasmamembraanilla enemmän ja
ksyloosin sisäänotto paranisi. Työssä tutkittiin myös RGT1-deleetion
vaikutusta H2220-nollamutanttikannassa (hxt1-7, gal2), jossa ekspressoitiin
HXT1- tai HXT7-geenejä. Lisäksi HXT1-geenin mutageneesillä pyrittiin
parantamaan kyseisen heksoositransportterin affiniteettia ksyloosille. Työn
tarkoituksena oli selvittää pystytäänkö muutoksilla parantamaan ksyloosin
sisäänottoa ja ksyloosimetaboliaa.
Ksyloosimetabolian tutkimiseksi RGT2-1- ja rgtl-mutaatiokantoja kasvatettiin
ksyloosilla aerobisesti ja anaerobisesti. Näistä pullokasvatuksista otettiin
näytteitä, joista tutkittiin heksoositransportterigeenien 1,2,3 ja 4
ekspressiotasoja. Lisäksi työssä tutkittiin molempien mutaatiokantojen
ksyloosin sisäänottoa in vitro.
RGT2-1- ja rgt1-mutaatiot lisäsivät HXT-geenien ekspressiota kasvatettaessa
kantoja ksyloosilla. rgtl-kannassa HXT3-geenin ekspressio kohosi
15-30-kertaisesti ja HXT4-geenin ekspressio 4-11-kertaisesti aerobisissa ja
anaerobisissa olosuhteissa. HXT1-geenin ekspressio lisääntyi rgtl-kannassa
5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-kannassa HXT3-geenin
ekspressio lisääntyi 7-15-kertaisesti ja HXT1-geenin ekspressio
5-6-kertaisesti aerobisissa olosuhteissa. RGT2-1-ja rgtl-mutaatiokantojen
ksyloosin sisäänottonopeudet (Vmax) olivat noin 400-500 nmol/min/mg proteiinia
ja Km arvot ksyloosille noin 150-180 mM. RGT1-geenin deleetion sekä
HXT7-ekspressioplasmidin sisältämä nollamutanttikanta kasvoi tutkituissa
ksyloosipitoisuuksissa maljalla paremmin kuin sen verrokki. Parantuneesta
ksyloosin sisäänotosta ja heksoositransportterigeenien ekspressiosta
huolimatta rgt1- ja RGT2-1-mutaatioiden vaikutukset solunsisäiseen
ksyloosimetaboliaan jäivät vähäisiksi.
Original language | Finnish |
---|---|
Qualification | Master Degree |
Awarding Institution |
|
Place of Publication | Helsinki |
Publisher | |
Publication status | Published - 2004 |
MoE publication type | G2 Master's thesis, polytechnic Master's thesis |
Keywords
- ksyloosi
- Rgt1p
- Rgt2p
- HXT-geenit